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上海奧析科學(xué)儀器有限公司紫外可見分光光度計(jì)UV1700PC測(cè)聚乙二醇?xì)埩袅繙y(cè)定法

本法系依據(jù)聚乙二醇與鋇離子和碘離子形成復(fù)合物

( 1 : 1 )，用上海奧析科學(xué)儀器有限公司紫外可見分光光度計(jì)法測(cè)定聚乙二醇含量。

測(cè)定法取供試品適量，用水稗釋，使蛋白質(zhì)濃度不高

于1 % ,即為供試品溶液。精密量取供試品溶液1. Oml, 加

入0 .5m o l/L髙氣酸溶液5 .0 m l,混勻，室溫放置1 5分鐘，

以每分鐘4000轉(zhuǎn)離心10分鐘。取上清液4ml, 加人氣化鋇

溶液（稱取氣化鋇5g，加水溶解至lOOmDl. Oml和0. lm o l/L

碘溶液(稱取碘化鉀2. O g ,加少量水溶解，然后加碘1.3g,

再加水至5 0 m l,搖勻）0. 5 m l,混勻，室溫反應(yīng)1 5分鐘，照

紫外-可見分光光度法（通則0401)，在波長(zhǎng)535nm處測(cè)定吸

光度；同時(shí)以lm l水代替供試品溶液，同法操作，即為空白

對(duì)照。

另精密稱取與供試品中聚乙二醇分子量相同的聚乙二醇

適量，加水溶解，并制成每lm l含聚乙二醇lOO^g的溶液，

即為聚乙二醇對(duì)照品貯備液。

取按T；表制備的每lm l含10.50Fg 的聚乙二醇對(duì)照品

溶液1 .0 m l,加人0. 5m o l/L高氣酸溶液5 .0 m l,混勻，自

“室溫放置15分鐘” 起，同法操作。

聚乙二醇含量m l - 1 10 20 30 40 50

聚乙二醇對(duì)照品貯備液/m l 0. 2 0. 4 0. 6 0. 8 1 .0

約1% 蛋白質(zhì)溶液/m l 0. 2 0. 2 0. 2 0. 2 0. 2

水/m l 1. 6 1. 4 1. 2 1 .0 0. 8

以聚乙二醇對(duì)照品溶液的濃度（pg/ml)對(duì)其相應(yīng)的吸光

度作直線回歸，將供試品溶液吸光度代入直線回歸方程，計(jì)

算出供試品溶液中聚乙二醇含量FC^g/ml) 。

按下式計(jì)算：

供試品聚乙二醇含量^ / “ 二^ ^ ” 父忉- 3

式中f .為供試品溶液中聚乙二醇含量，pg/tnl;

n 為供試品稀釋倍數(shù)。

【附注】（1 )整個(gè)比色過程應(yīng)在試劑加人后的15.4 5分

鐘內(nèi)完成，否則將要影響結(jié)果。

(2 )本法的靈敏度隨被測(cè)聚乙二醇的分子量的增加而

提高。

(3 )1%的蛋白質(zhì)溶液系用不含聚乙二醇的蛋白質(zhì)溶液

配制。

3 2 0 3聚山梨酯80殘留量測(cè)定法

本法系依據(jù)聚山梨釀8 0中的聚乙氧基（Polyethoxylated)

和銨鉆硫氰酸鹽反應(yīng)形成藍(lán)色復(fù)合物，可溶于二氣甲烷，

用比色法測(cè)定聚山梨酯8 0含量。

測(cè)定法量取供試品1 .0m l于離心管中，加乙醇-氱化

鈉飽和溶液5 m l,搖勻，以每分鐘3 0 0 0轉(zhuǎn)離心10分鐘，取

上清液，再用乙醇-氣化鈉飽和溶液1 .0m l小心沖洗管壁，

洗液與上清液合并，以每分鐘3 0 0 0轉(zhuǎn)離心10分鐘，上淸液

置55°C水浴中，用空氣吹掃法將其濃縮至0.1.0.5ml，加

lm l水溶解。準(zhǔn)確加人二氣甲烷2. 0ml、硫氰鈷銨溶液(稱取

硝酸鉆6.0g、硫氰酸銨40. 0 g ,加水溶解并稀釋至200ml)

3.0ml，加塞，混勻，室溫放置1 .5小時(shí)，每15分鐘振蕩1

次，測(cè)定前靜置半小時(shí)，棄上層液，照紫外_可見分光光度

法（通則0 4 0 1 ) ,在波長(zhǎng)620nm處測(cè)定下層二氣甲烷液的吸

光度。用二氣甲烷作空白對(duì)照。

精密量取聚山梨酯8 0對(duì)照品溶液（取聚山梨酯8 0約

lOOmg,精密稱定，加水溶解后置100ml量瓶中，加水稀釋

至刻度）CV1、1CV1、25^x1、50^1, 75^1, 100F1, 加人預(yù)先加

人lm l水的離心管中混勻，準(zhǔn)確加人二氣甲烷2.0ml、硫氰

鉆銨溶液3.0ml，加塞，混勻，自“室溫放置1 . 5 小時(shí)”

起，同法操作。

以上述聚山•梨酯8 0系列濃度（卜g /m l)對(duì)其相應(yīng)的吸光

度作直線回歸，相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.98，將供試品吸光度

代入直線回歸方程，求得供試品聚山梨酯8 0含量(fxg/ml) 。